Universal SYBR GREEN qPCR Premix (lanu moana)
Numera pusi: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) o se fofo muamua mo le 2 × taimi moni quantitative PCR amplification o loʻo faʻaalia i le maualuga ma le faʻapitoa, e lanumoana i le lanu, ma e iai le aʻafiaga o faʻataʻitaʻiga faʻaopoopoga suʻega.O le vaega autu o le Taq DNA polymerase e fa'aogaina ai le antibody hot start e fa'agata lelei ai le fa'atuputeleina e le fa'apitoa ona o le fa'amalo muamua a'o sauniuni fa'ata'ita'iga.I le taimi lava e tasi, o le fua faʻatatau e faʻaopoopoina mea faʻalauiloa e faʻaleleia ai le faʻaleleia atili o le PCR tali ma tutusa le faʻalauteleina o kenera ma mea eseese GC (30 ~ 70%), ina ia mafai ai e le PCR quantitative ona maua se fesoʻotaʻiga laina lelei i se lautele quantitative. itulagi.O lenei oloa o loʻo i ai faʻapitoa ROX Passive Reference Dye, lea e faʻatatau i le tele o meafaifaʻaili qPCR.E le manaʻomia le fetuunaʻi o le faʻaogaina o le ROX i luga o meafaifaʻaili eseese.E na'o le mana'omia o le fa'aopoopoina o primers ma fa'ata'ita'iga e saunia ai le faiga o tali mo le fa'ateleina.
Vaega
Universal Blue qPCR Master Mix
Tulaga teuina
O le oloa e lafo i aisa pusa ma e mafai ona teuina i le -25℃~-15℃ mo le 18 masina.E tatau ona aloese mai le susulu malosi o le malamalama pe a teuina poʻo le saunia o le faʻaogaina o le faiga.
Fa'amatalaga
| Fa'atotonuga | 2× |
| Su'esu'ega auala | SYBR |
| auala PCR | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Ituaiga fa'ata'ita'iga | DNA |
| Mea faigaluega fa'aoga | Le tele o meafaigaluega qPCR |
| Ituaiga oloa | SYBR premix mo le taimi moni o le fluorescence quantitative PCR |
| Talosaga i (talosaga) | Fa'aaliga Gene |
Faatonuga
1.Reaction System
| Vaega | Volome(μL) | Volome(μL) | Fa'ai'uga Fa'amau |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Fa'amuamua (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| Fa'ata'ita'i (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | e oo atu i le 50 | e oo atu i le 20 | - |
[Manatua]: Faafefiloi mae'ae'a a'o le'i fa'aogaina ina ia 'alofia ai le tele o mata'upu mai le lulu malosi.
a) Fa'atonuga muamua: O le fa'auluuluga fa'ai'u mulimuli o le 0.2μmol/L, ma e mafai fo'i ona fetu'una'i ile va ole 0.1 ma le 1.0μmol/L pe a talafeagai ai.
e) Fa'atonuga o fa'ata'ita'iga: Afai o le fa'ata'ita'iga o se vaifofo fa'asoa cDNA, o le voluma e fa'aaogaina e le tatau ona sili atu i le 1/10 o le aofa'i atoa o le tali qPCR.
i) Fa'aliga fa'ata'ita'iga: E fautuaina e fa'alili le vaifofo fa'asoa cDNA ile 5-10 taimi.Ole aofa'iga sili ona lelei ole fa'apena fa'aopoopo e sili atu pe a maua le tau Ct ile fa'ateleina ole 20-30 ta'amilosaga.
d) Reaction system: E fautuaina e faʻaaoga le 20μL poʻo le 50μL e faʻamautinoa ai le aoga ma le toe faʻaogaina o le faʻalauteleina o le faʻasologa o kene.
u) Sauniuniga faiga: Fa'amolemole sauni i totonu o le nofoa sili ona mama ma fa'aoga fa'amatalaga ma fa'agaau fa'agaoioiga e aunoa ma ni mea e to'esea ai;e fautuaina le fa'aogaina o fa'amatalaga fa'atasi ai ma pusa fa'amama.'Alo'ese mai le fa'a'ese'ese ma le aerosol.
2.Polokalama tali
Polokalama masani
| Laasaga taamilo | Temp. | Taimi | Ta'amilosaga |
| Uluai denaturation | 95℃ | 2 minu | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10 sec | 40 |
| Fa'amauina/Fa'aopoopo | 60℃ | 30 sec★ | |
| La'asaga pi'o liusuavai | Meafaigaluega Fa'aletonu | 1 | |
Polokalama vave
| Laasaga taamilo | Temp. | Taimi | Ta'amilosaga |
| Uluai denaturation | 95℃ | 30 sec | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 3 sec | 40 |
| Fa'amauina/Fa'aopoopo | 60℃ | 20 sec★ | |
| La'asaga pi'o liusuavai | Meafaigaluega Fa'aletonu | 1 | |
[Manatua]: O le polokalame vave e talafeagai mo le tele o kenera, ma e mafai ona faʻataʻitaʻiina polokalame masani mo kenera fausaga lua lavelave taʻitasi.
a) Su'ega vevela ma le taimi: Fa'amolemole fetu'una'i e tusa ai ma le umi o le fa'amuamua ma le kenera fa'atatau.
b) Fa'ailoga fa'alili (★): Fa'amolemole seti le fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga e tusa ai ma mana'oga i fa'atonuga mo le fa'aogaina o le meafaigaluega.
c) Li'u fa'alili: E mafai ona fa'aoga masani le polokalama fa'aoga.
3. I'uga Iloiloga
Le itiiti ifo i le tolu kopi fa'aola e mana'omia mo su'ega fa'atusatusa.A maeʻa le tali, e manaʻomia ona faʻamaonia le faʻapipiʻi faʻamalosi ma le faʻafefeteina.
3.1 Fa'atelega Pipi:
O le fa'aupuga fa'atuputeleina masani o le S-foliga.Ole su'esu'ega fa'afuainumera e sili ona sa'o pe a pa'u le tau o le Ct ile va ole 20 ma le 30. Afai ole tau ole Ct e itiiti ifo ile 10, e tatau ona fa'amama le fa'ata'ita'iga ma toe faia le su'ega.A oʻo i le Ct tau i le va o le 30-35, e manaʻomia le faʻateleina o le faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga poʻo le tele o le faʻaogaina o faiga, ina ia faʻaleleia ai le faʻaleleia atili ma faʻamautinoa le saʻo o le suʻesuʻeina o taunuuga.A sili atu le tau o le Ct nai lo le 35, e le mafai e le suʻega suʻega ona suʻesuʻeina faʻatusatusaina le faʻamatalaga o le kene, ae mafai ona faʻaoga mo suʻesuʻega faʻapitoa.
3.2 Li'u liusuavai:
O le tasi pito i luga o le faʻafefete faʻafefeteina o loʻo faʻaalia ai e lelei le faʻapitoa o le tali ma e mafai ona faia le suʻesuʻega quantitative;afai e faʻaalia e le faʻafefete faʻafefete faʻalua poʻo le tele o tumutumu, e le mafai ona faia suʻesuʻega quantitative.O lo'o fa'aalia i luga ole la'au fa'asao fa'alua, ma e tatau ona fa'amasinoina pe o le pito e le fa'atatauina o le primer dimer po'o le fa'alauteleina e le DNA agarose gel electrophoresis.Afai o se dimer muamua, e fautuaina e faʻaitiitia le faʻaogaina muamua poʻo le toe faʻatulagaina o mea muamua e maualuga le faʻaleleia lelei.Afai e le fa'apitoa le fa'alauteleina, fa'amolemole fa'aopoopo le vevela fa'afefete, po'o le toe fa'avasegaina o primers ma fa'apitoa.
Fa'amatalaga
Fa'amolemole fai le PPE e mana'omia, pei o le ofu su'esu'e ma totigilima, ia mautinoa lou soifua maloloina ma le saogalemu!
O lenei oloa e mo su'esu'ega fa'aoga NA'O!
