Multiplex qPCR Su'ega Premix
Numera pusi: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) o se fofo muamua mo le 2 × taimi moni quantitative PCR amplification o loʻo faʻaalia i le maualuga o le maʻaleʻale ma le faʻapitoa, e lanu lanumoana, ma e iai le aʻafiaga o faʻaopoopoga faʻataʻitaʻiga.O lenei oloa o le 2× Mix fa'afefiloi muamua fa'afefiloi e mafai ai e o'o atu i le fa fa'aputuga fa'aputuga PCR i se tali lelei e tasi.O lenei oloa o loʻo i ai le faʻaogaina o le antibody metotia e amata ai le vevela Taq enzyme, faʻaleleia atili le faʻalauteleina ma le faʻapitoa.I le taimi lava e tasi, o lenei oloa ua matua faʻamalieina le tele-reaction buffer, lea e mafai ona faʻaleleia atili le faʻaleleia atili o le tali ma faʻaleleia le faʻaleleia lelei o faʻataʻitaʻiga maualalo.O lenei oloa e mafai ona fa'aogaina mo le fa'avasegaina o le genotyping ma le telex quantitative analysis.
Fa'amatalaga
| Amata vevela | Fa'atosina vevela amata |
| Su'esu'ega auala | Su'esu'ega muamua |
| auala PCR | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Ituaiga fa'ata'ita'iga | DNA |
Tulaga Teuteu
O le oloa e lafo i aisa mago ma e mafai ona teuina i le -25 ~ -15℃ mo le 2 tausaga.
Faatonuga
1. TaliFaiga
| Vaega | Volume (μL) | Fa'ai'uga Fa'amau |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Fa'afefiloi muamua (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| Fa'afefiloi su'esu'e (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox reference vali | 0.5 | 1× |
| Fa'ata'ita'iga DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | e oo atu i le 25 | - |
Fa'amatalaga:Faafefiloi mae'ae'a a'o le'i fa'aogaina ina ia 'alofia ai le tele o pupuga mai le lulu malosi.
a.Ulua'i fa'atonuga: Fa'afefiloi Muamua e aofia ai le tele o ta'i ta'imua, e masani lava ta'itasi ta'itasi ile fa'amauina mulimuli ole 0.2 μmol/L ma e mafai fo'i ona fetu'una'i ile va ole 0.1 ma le 0.5 μmol/L pe a talafeagai ai.
e.Fa'atonuga ole su'esu'ega: Fa'afefiloiga ole su'esu'ega e iai le tele o su'esu'ega ma fa'ailoga fela'ua'i eseese, ma e mafai ona fetu'una'i le fa'atonuga o su'esu'ega ta'itasi ile va ole 50 ma le 250 nmol/L e tusa ai ma tulaga fa'apitoa.
1.Rox dye reference: E faʻaaogaina i luga ole taimi moni PCR faʻalauteleina mea faigaluega e pei ole Applied Biosystems e faʻasaʻo ai le sese ole faailo ole fluorescence na faia i le va o vaieli;o lenei oloa e le oi ai se fa'asinomaga lanu Rox.E fautuaina le Cas#10200 pe a mana'omia.
2.Fa'aliga fa'ata'ita'iga: e ma'ale'ale le qPCR, ma e fautuaina e fa'amama le fa'ata'ita'iga mo le fa'aoga.Afai o le mamanu o se cDNA stock solution, o le voluma mamanu e le tatau ona sili atu i le 1/10 o le aofaiga atoa.
3.Reaction system: 25μL, 30μL poʻo le 50 μL ua fautuaina e faʻamautinoa le aoga ma le toe faʻaleleia o le faʻalauteleina o le kenera.
4.Sauniuniga faiga: Fa'amolemole sauni i totonu o le nofoa fa'amama sili, ma fa'aoga fa'amatalaga ma fa'aau fa'aau e aunoa ma ni toega nuclease;e fautuaina le fa'aogaina o fa'amatalaga fa'atasi ai ma pusa fa'amama.'Alo'ese mai le fa'a'ese'ese ma le aerosol.
2.Polokalama tali
| Laasaga taamilo | Temp. | Taimi | Ta'amilosaga |
| Uluai-denaturation | 95 ℃ | 5min | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 15sec | 45 |
| Fa'amauina/Fa'aopoopo | 60 ℃ | 30sec |
Fa'amatalaga:
1.Fa'amauina/Fa'aopoopo: E mafai ona fetu'una'i le vevela ma le taimi e tusa ai ma le tau Tm fa'atulagaina.
2.Fa'ailoga fa'alilolilo: Ole taimi ole mauaina ole fa'ailoga e mana'omia mo meafaifa'aili e iloa ai qPCR eseese e ese, fa'amolemole fa'atulaga e tusa ai ma le taimi fa'atapula'a.O le taimi o le tele o meafaifa'aili masani ua fa'atulaga e fa'apea:
20 sec: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Anapogi
31 sec: Applied Biosystems 7300
32 sec: Applied Biosystems 7500
Fa'amatalaga
Fa'amolemole fai le PPE e mana'omia, o se ofu su'esu'e ma totigilima, ia mautinoa lou soifua maloloina ma lou saogalemu!
