BspQI
BspQI e mafai ona toe faʻaalia i le E. coli e mafai ona iloa nofoaga patino ma gaosia i lalo
O le BspQI, o le IIs restriction endonuclease restriction endonuclease, e maua mai i le recombinant E. coli strain o loʻo tauaveina le BspQI gen faʻapipiʻi ma suia mai Bacillus sphaericus.E mafai ona iloa nofoaga fa'apitoa, ma fa'asologa o fa'asologa ma nofoaga va'ava'ai e fa'apea:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Oloa Fa'ailoga
1. Gaoioiga maualuga, Fa'aluina vave;
2. Gaoioiga maualalo fetu, faʻamautinoa le tipi saʻo e pei o le "scalpel";
3. A aunoa ma le BSA ma manu-fuafua fua;
Methylation maaleale
Da'u methylation:Le Ma'ale'ale;
Dcm methylation:Le Ma'ale'ale;
CpG Methylation:Le Ma'ale'ale;
Tulaga teuina
O le oloa e tatau ona lafoina ≤ 0 ℃;Teu i le -25~- 15℃ tulaga.
Taofi puipui
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X- 100 ma le 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C).
Fa'amatalaga Vaega
E tasi le iunite o lo'o fa'amatalaina o le aofa'i o le enzyme e mana'omia e fa'alilo ai le 1µg ole Internal Control DNA ile 1 itula ile 50°C ile aofa'iga ole voluma ole tali ole 50 μL.
Puleaina lelei
Su'esu'ega Fa'amama Polotini (SDS-PAGE):O le mama o le BspQI na ≥95% faʻamoemoeina e le SDS-PAGE suʻesuʻega.
RNase:10U o le BspQI ma le 1.6μg MS2 RNA mo le 4 itula i le 50 ℃ e leai se faʻaleagaina e pei ona fuafuaina e le electrophoresis gel agarose.
Gaoioiga DNase e le fa'apitoa:10U o BspQI ma 1μg λ DNA i le 50 ℃ mo 16 itula, faʻatusatusa i le 50 ℃ mo le 1hour, e leai se DNA sili atu e pei ona fuafuaina e le electrophoresis gel agarose.
Lition ma Recutting:A maeʻa le faʻamaʻiina o le 1 μg λDNA faʻatasi ma le 10U BspQI, e mafai ona faʻapipiʻi vaega o DNA i le T4 DNA ligase ile 16ºC.Ma o nei vaega faʻapipiʻi e mafai ona toe tipi i le BspQI.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-fa'apitoa TaqMan qPCR su'esu'ega na fa'aalia ai le toega o le genome E.coli ≤ 0.1pg/ul.
Toega polotini talimālō:≤ 50 ppm
siama Endotoxin: LAL-suʻega, e tusa ai ma le Chinese Pharmacopoeia IV 2020 lomiga, gel limit test method, tulafono lautele (1143).E tatau ona ≤10 EU/mg mea e maua i le endotoxin siama.
Faiga ma tulaga
| Vaega | Volume |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Puipuiga | 5 μL |
| dd H2O | E oʻo atu i le 50 μL |
Tulaga tali: 50℃, 1~ 16 h.
Fa'aleaogaina o le vevela:80°C mo le 20 min.
O le fa'atonuga fa'atonuga ma tulaga e mafai ona maua ai le fa'amama lelei o le enzyme, lea e mo na'o fa'amatalaga, fa'amolemole fa'afeso'ota'i i'uga fa'ata'ita'iga mo fa'amatalaga.
Fa'aoga oloa
Fa'atapula'a endonuclease digestion, Fa'atosina vave.
Fa'amatalaga
1. Ole voluma ole enzyme ≤ 1/10 ole voluma tali.
2. E mafai ona tupu le gaioiga o fetu pe a sili atu i le 5% le maualuga ole glycerol.
3. E mafai ona tupu le gaioioiina pe a o'o i lalo ole fua fa'atatau o le palapala.
