Robusstart Taq DNA Polymerase

Robustart Taq DNA Polymerase ose amataga vevela DNA polymerase.O lenei oloa e le gata e mafai ona sili atu le taofiofia o le tali e le faʻapitoa e mafua mai i le faʻaogaina o mea faʻapitoa poʻo le faʻapipiʻiina muamua i le faagasologa o sauniuniga ma le faʻalauteleina o le PCR.O le mea lea, e sili ona lelei ma e sili atu ona aoga mo le faʻalauteleina o faʻataʻitaʻiga maualalo, ma e talafeagai mo le faʻateleina o le PCR faʻateleina tali.E le gata i lea, o lenei oloa o loʻo i ai se faʻaoga lelei tele, ma e mafai ona maua iʻuga faʻaleleia mautu i ituaiga eseese o tali PCR.

Vaega

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ saoloto) (filifiliga)

3.25 mM MgCl₂(filifiliga)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ free) e lē o iai le dNTP ma le Mg²+, faamolemole faaopoopo i ai dNTPs ma MgCl₂pe a saunia le faiga tali.

Talosaga Fautuaina

1.Fa'atele vave.

2.Fa'ateleina fa'atele.

3.Fa'asa'o sa'o o le toto, swabs, ma isi fa'ata'ita'iga.

4.Su'eina fa'ama'i manava.

Tulaga Teuteu

-20°C mo le teuina umi, e tatau ona fa'afefiloi lelei a'o le'i fa'aogaina, aloese mai le fa'a'aisa fa'asao.

*Afai e timu pe a uma le pusaaisa, e masani lava;e fautuaina e faʻafetaui i le vevela potu aʻo leʻi faʻafefiloi ma faʻaoga.

Fa'amatalaga Vaega

E tasi le iunite galue (U) o loʻo faʻamatalaina o le aofaʻi o le enzyme e aofia ai le 10 nmol o le deoxyribonucleotide i totonu o mea e le mafai ona faʻaaogaina i le 74 ° C mo le 30mins e faʻaaoga ai le DNA sperm activated salmon e fai ma faʻataʻitaʻiga / primer.

Puleaina lelei

1.SDS-PAGE electrophoretic mama sili atu nai lo le 98%.

2.Fa'aola maaleale, fa'atonuga fa'aputuga, mautu.

3.Leai se gaioiga fa'atosina, leai se endonuclease po'o le fa'aleagaina o le exonuclease.

Faatonuga

Seti Tali

Fa'amatalaga:

1) a.E le o iai i le pa'u le dNTP ma le Mg²+, fa'amolemole fa'aopoopo le dNTP ma le MgCl₂pe a saunia le faiga tali.

2) e.Afai e fa'aogaina mo le qPCR/qRT-PCR, e tatau ona fa'aopoopo i ai su'esu'ega felanulanua'i i le faiga o tali.E masani lava, o se fa'auluuluga fa'ai'uga mulimuli o le 0.2 μM o le a maua ai fa'ai'uga lelei;afai e le lelei le faatinoga o le tali, e mafai ona fetuutuuna'i le fa'atonuga muamua ile va ole 0.2-1 μM.Ole fa'atonuga ole su'esu'ega e masani ona fa'asili ile va ole 0.1-0.3 μM.E mafai ona faia fa'ata'ita'iga fa'agasologa fa'atotonu e su'e ai le tu'ufa'atasiga sili o le fa'avae ma le su'ega.

Polokalama uila uila vevela

Fa'amatalaga

1.Ole fua ole fa'ateleina ole DNA polymerase vave e le tatau ona itiiti ifo ile 1 kb/10 s.O le maualuga o le vevela ma le pa'ū fua, faʻaogaina o le vevela ma le faʻaogaina o le vevela o meafaifaʻaili PCR eseese e matua ese lava, o lea e fautuaina ai le faʻaogaina o tulaga sili ona lelei mo le mea faigaluega PCR vave.

2.O le faiga e sili ona fetuutuunai, ma le maualuga maualuga ma le maaleale.

3.E talafeagai mo le faʻaaogaina e pei o le maualuga o le maʻaleʻale PCR suʻesuʻeina reagents, ma e mafai ona faʻaaogaina i le tele o PCR faʻateleina tali.

4.5′→3′ gaoioiga polymerase, 5′→3′ gaoioiga exonuclease;leai 3′→5′ gaoioiga exonuclease;leai se galuega fa'asa'o.

5.E fetaui lelei mo su'esu'ega fa'atatau ma fa'atusatusaga ole PCR ma le RT-PCR.

6.O le 3' pito o le oloa PCR o le A, lea e mafai ona faʻapipiʻi saʻo i se T vector.

7.O le auala e tolu-laasaga e fautuaina mo primers e maualalo le vevela o le annealing poʻo le faʻalauteleina o vaega e umi atu i le 200 bp.