Rnase Inhibitor
Murine RNase inhibitor o se recombinant murine RNase inhibitor fa'aalia ma fa'amamāina mai E.coli.E fusifusia i le RNase A, B poʻo le C i se fua faatatau 1: 1 e ala i le faʻaogaina o le non-covalent, ma faʻafefe ai le gaioiga o enzymes e tolu ma puipuia le RNA mai le faʻaleagaina.Ae ui i lea, E le aoga i RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H poʻo RNase mai Aspergillus.Murine RNase inhibitor na tofotofoina e RT-PCR, RT-qPCR ma IVT mRNA, ma sa fetaui ma fefaʻatauaʻiga Reverse transcriptases, DNA polymerases ma RNA polymerases.
Pe a faʻatusatusa i tagata RNase inhibitors, murine RNase inhibitors e le o iai ni cysteine se lua e sili ona maaleale i le faʻamaʻiina e mafua ai le le faʻaaogaina o le inhibitor.O le mea lea e faʻamautu ai i le maualalo o le DTT (itiiti ifo i le 1 mM).O lenei vaega e talafeagai mo le fa'aoga i fa'agaioiga o lo'o i ai le maualuga o le DTT e fa'aleagaina ai le fa'alavelave (fa'ata'ita'iga Real-time RT-PCR).
Atalosaga
O lenei oloa e mafai ona faʻaaogaina lautele i soʻo se faʻataʻitaʻiga e mafai ai e le RNase faʻalavelave e aloese mai le faʻaleagaina o le RNA, e pei o:
1.Fa'asologa o le laina muamua o le cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ma isi.
2.Puipuia le RNA mai le fa'aleagaina i le taimi o fa'aliliuga/fa'aliliuga in vitro (fa'ata'ita'iga, in vitro viral replication system).
3.Faʻasaina o le gaioiga RNase i le taimi o le vavaeeseina o le RNA ma le faʻamamaina.
Tulaga Teuteu
E mafai ona teuina le oloa ile -25～-15 ℃, aoga mo le 2 tausaga.
Taofi puipui
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ma le 50% glycerol.
Fa'amatalaga o le iunite
O le aofaʻi o le inhibitor RNase murine e manaʻomia e faʻalavelave ai le gaioiga o le 5ng o le ribonuclease A e 50% na faʻamatalaina o le tasi iunite (U).
Mole mole mamafa ole polotini
O le mamafa mole o le inhibitor RNase murine e 50 kDa.
Puleaina lelei
Exonuclease Gaoioiga:
40 U o murine RNase inhibitor ma le 1 μg λ -Hind III digest DNA i le 37 ℃ mo 16 itula e leai se faʻaleagaina e pei ona fuafuaina e le electrophoresis gel agarose.
Gaoioiga Endonuclease:
40 U o murine RNase inhibitor ma le 1μg λ DNA i le 37 ℃ mo 16 itula e leai se faʻaleagaina e pei ona fuafuaina e le electrophoresis gel agarose.
Nicking Gaoioiga:
40U o le inhibitor RNase murine ma le 1μg pBR322 i le 37 ℃ mo le 16 itula e leai se faʻaleagaina e pei ona fuafuaina e le electrophoresis gel agarose.
RNase Gaoioiga:
40U o le inhibitor RNase murine ma le 1.6μ g MS2 RNA mo le 4h i le 37 ℃ e leai se faʻaleagaina e pei ona fuafuaina e le electrophoresis gel agarose.
E.coli DNA:
40 U o murine RNase inhibitor ua suʻeina mo le i ai o le E. coli genomic DNA e faʻaaoga ai TaqMan qPCR faʻatasi ai ma primers faʻapitoa mo le E. coli 16S rRNA locus.O le E. coli genomic DNA contamination e ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1.Oscillation sauā po o le faaosofia o le a taitai atu i enzyme inactivation.
2.O le maualuga maualuga o le vevela o lenei mea o le inhibitor o le 25-55 ℃, ma na le faʻaaogaina i le 65 ℃ ma luga.
3. O gaioiga a RNase H, RNase 1 ma RNase T1 e leʻi faʻalavelaveina e le inhibitor RNase murine.
4. O le faʻasaina o le gaioiga RNase na maua i le tele o le pH (pH 5-9 o loʻo galue uma), ma o le gaioiga sili ona maualuga na matauina i le pH 7-8.
5. Talu ai e masani ona taofia e ribonucleases le gaioiga i lalo o tulaga denaturing, e tatau ona faʻaeteete e aloese mai le denaturing RNase Inhibitor molecules ua faʻalavelave i se ribonuclease.Ina ia puipuia le tuʻuina atu o le ribonuclease malosi, e tatau ona aloese mai le vevela e sili atu i le 50 °C ma le maualuga o le urea poʻo isi vailaʻau.
