M-MLV Reverse Transcriptase
O le RevScript Reverse transcriptase e maua mai i le genetic engineering technology.O lo'o i ai le maualuga o le cDNA synthesis gafatia, fa'amautu fa'amama ma le fa'atapula'aina o le vevela (e o'o i le 60°C).O le oloa faʻapipiʻiina cDNA e oʻo atu i le 10 kb.E faʻaleleia ai le vavalalata o faʻataʻitaʻiga ma e fetaui lelei mo le toe faʻaliliuina o faʻataʻitaʻiga RNA faʻatasi ai ma faʻalavelave faʻapitoa lona lua poʻo genes kopi maualalo.
Vaega
| Vaega | HC2003B (10,000U) | HC2003B (5*10,000U) | HC2003B (200,000U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 mL |
| 5 × RevScript Buffer | 250 μL | 1.25 mL | 5 ml |
Tulaga Teuteu
O lenei oloa e tatau ona teuina i le -25°C~-15°C mo le 2 tausaga.
Fa'amatalaga Vaega
E tasi le iunite e tu'ufa'atasia le 1 nmol o le dTTP i mea e le mafai ona fa'asalaina i le 10 minute i le 37°C e fa'aaoga ai le Oligo(dT) e fai ma fa'amuamua.
Seti Tali
1.Denaturation of RNA template (O lenei laasaga e filifili, denaturation o le RNA template e fesoasoani e tatala le fausaga lona lua, lea o le a faʻaleleia ai le gaosiga o le cDNA muamua.)
| Vaega | Volume (μL) |
| RNase free ddH2O | I le 13 |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) po'o Fa'ailoga Fa'afua (50 μmol/L) Po'o Gene Specific Primers (2 μmol/L) | 1 |
| pe 1 | |
| pe 1 | |
| RNA mamanu | X a |
Fa'amatalaga:
1) a: Aofa'iga RNA: 1-5 ug po'o le mRNA: 1-500 ng
2) Taofi ile 65°C mo le 5 minute, ona fa'asolo loa lea ile aisa ile malulu mo le 2 minute.Centrifugation pu'upu'u e fa'aputu ai le sua, fa'aopoopo i ai le fa'afofoga fa'aliliuga fa'aliliu e pei ona fa'aalia i le siata o lo'o mulimuli mai.Fa'afefiloi lemu.
1.Sauniuniga o le paluga tali (20 μL voluma)
| Vaega | Volume (μL) |
| Faafefiloi o le laasaga muamua | 13 |
| 5 × Faʻamau | 4 |
| dNTP Mix (10nmol/L) | 1 |
| Toe Transcriptase (200 U/μL) | 1 |
| RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 |
1.Fai le tali i lalo o tulaga nei:
| Vevela (°C) | Taimi |
| 25 °Ca | 5min |
| 42 °Cb | 15-30min |
| 85 °Cc | 5min |
Fa'amatalaga:
1) a.O le fa'a'ofuina i le 25°C mo le 5mins e mana'omia mo na'o le fa'aogaina o le fa'aogaina fa'atosina.Fa'amolemole fa'ase'e le la'asaga lea pe a fa'aaoga Oligo (dT)18po'o le Gene Specific Primer.
2) e.Ole vevela ole fa'aliliuga fautuaina ole 42°C, Mo fa'ata'ita'iga o lo'o iai fausaga lua lavelave po'o le maualuga ole GC, e fautuaina e fa'ae'e le vevela ole tali ile 50-55°C.
3) i.Fa'avevela ile 85°C mo le 5mins e fa'agata ai le fa'aliliuina o le transcriptase.
4) O le oloa e mafai ona faʻaoga saʻo i PCR poʻo qPCR tali, pe teuina i le -20 ° C mo le teuina mo taimi pupuu.E fautuaina e fa'avasega oloa ma teu i le -80 ° C mo le teuina umi.Aloese mai le fa'a'aisa soo.
5) O le oloa e talafeagai mo le tasi-laasaga RT-qPCR, e fautuaina e faʻaopoopo le 10-20 U reverse transcriptase mo 25μL reaction system uma, poʻo le faasolosolo malie ona faʻateleina le aofaʻi o le transcriptase faʻasolosolo e tusa ai ma le tulaga moni.
Fa'amatalaga
1.Fa'amolemole fa'amama le nofoaga fa'ata'ita'i;E tatau ona ofuina totigilima mama ma matapulepule i le taimi o le taotoga.O mea fa'aaoga uma e fa'aaogaina i le su'ega e tatau ona RNase saoloto e puipuia ai le fa'aleagaina o le RNase.
2.O faiga uma e tatau ona faia i luga o le aisa e puipuia ai le faʻaleagaina o le RNA.
3.O faʻataʻitaʻiga RNA maualuga e fautuaina e faʻamautinoa ai le maualuga o le lelei o le faʻaliliuga faʻaliliu.
4.O lenei oloa e mo na'o su'esu'ega.
5.Fa'amolemole fa'agaioi i ofu su'esu'e ma totigilima lafoa'i, mo lou saogalemu.
