DNA Extraction Mini Kit
O lenei pusa o loʻo faʻaogaina le faʻaogaina o le faʻaogaina o le faʻaogaina ma le silica gel column purification technology, lea e mafai ona toe maua mai 70 bp - 20 kb DNA fragments mai faʻasalalauga eseese o TAE poʻo TBE agarose gel.DNA adsorption column e mafai ona fa'apipi'i fa'apitoa le DNA i lalo ole tulaga maualuga masima.E le gata i lea, e mafai e le pusa ona faʻamamā saʻo vaega DNA mai oloa PCR, faiga faʻafouga enzymatic poʻo oloa DNA mamaʻi na maua mai i isi metotia, ma aveese mea leaga e pei o polotini, isi mea faʻaola, ion masima inorganic ma primers oligonucleotide.E mafai ona faʻamautinoa e mafai ona maeʻa le faʻamamaina i totonu ole 10-15min.O le DNA faʻamamāina e mafai ona faʻaoga saʻo mo ligation, suiga, enzyme digestion, in vitro transcription, PCR, sequencing, microinjection, ma isi.
Tulaga teuina
Teu i le -15 ~ -25℃ ma felauaiga ile vevela potu.
Vaega
| Vaega | (100 rxns) |
| Puipuiga o le GDP | 80 ml |
| Taofi GW | 2 × 20 ml |
| Elution Buffer | 20 ml |
| FastPure DNA Mini Columns-G | 100 |
Fa'amautu le GDP:DNA fusifusia pa'u.
Puipui GW:Fufulu pa puipui;fa'aopoopo i ai le ethanol atoatoa ile voluma fa'ailoa ile fagu a'o le'i fa'aogaina.
Elution Buffer:Elution.
FastPure DNA Mini Columns-G:DNA adsorption koluma.
Fa'aputuga 2 ml:Fa'aputu mo le fa'amama.
Mea Sauniuni
1.5 ml faʻamaʻi faʻamaʻi, ethanol atoatoa ma isopropanol (pe a DNA vaega ≤100 bp, faʻaopoopo le 1 voluma
isopropanol i le 1 voluma gel), vai taele.
Fa'ata'ita'iga Fa'agasologa
Fa'aopoopo i ai le 80 ml o le ethanol e fa'afefete ai le Buffer GW e pei ona fa'ailoa i luga o le pine a'o le'i fa'aogaina, teu i le potu vevela.
Fa'ainisinia
1. fofo tali PCR
Fuafuaga e aveese ai le gel: Faaopopo le voluma tutusa Buffer GDP PCR reaction solution recovery scheme:Fa'aopoopo fa'a 5 taimi le voluma Pa'u
2. GDP Fa'atatau le voluma o gel(100 μl tutusa 100 mg)
Fa'amuta gel
3. Fa'avevela ile 50 ~ 55℃
4. Fufulu Fusi
Fa'aopoopo le 300 μL ole Buffer GDP*
Faaopopo le 700 μL o le Buffer GW
Faaopopo le 700 μL o le Buffer GW
5. Elute
Fa'aopoopo le 20 - 30μL ole Elution Buffer po'o le vai fa'a'ona
Fa'amatalaga* PCR toe fa'aleleia le sua e aunoa ma lenei la'asaga
Polokalama e aveese ai gel
1. A mae'a le DNA electrophoresis mo le fa'avasegaina o vaega o le DNA, 'ese'ese le fasi fasi DNA e tasi mai le gel agarose i lalo ole malamalama UV.E fautuaina le fa'aogaina o le pepa fa'afefete e mitiia ai le susu o le gel ma fa'aitiitia le lapo'a o le fasi gel e ala i le 'ave'esea o agarose fa'aopoopo i le mea e te mafaia.Fua le fasi gel (e aunoa ma le microcentrifuge tube) e fuafua ai lona voluma: O le voluma o le 100 mg gelslice e tusa ma le 100 μL, fa'apea o le mamafa o le 1g/ml.
2. Faʻaopoopo le aofaʻi tutusa Buffer GDP, faʻapipiʻi i le 50 ~ 55 ℃ mo le 7-10 min (e tusa ai ma le tele o le gel, fetuutuunai le taimi faʻapipiʻi seia maeʻa atoa le gel).Su'e le fa'agaau fa'a-2 taimi a'o fa'atupu.
Δ Faʻaopoopoina o le 1-3 volumes o le Buffer GDP o le a le aʻafia ai le toe faʻaleleia o DNA.Afai o le vaega DNA e toe maua mai <100 bp, 3 voluma o le Buffer GDP e manaʻomia ona faʻaopoopo;pe a faʻamavae atoa le fasi gel, faʻaopopo le 1 voluma o le isopropanol ma faʻafefiloi lelei, ona faʻaauau lea i le isi laasaga.
3. Centrifuge faʻapuupuu e aumai le faʻataʻitaʻiga i le pito i lalo o le paipa, faʻapipiʻi le FastPure DNA Mini Columns-G i totonu o le Collection Tubes 2 ml, faʻafeiloaʻi ma le faʻaeteete le fofo sili atu i le 700 μL i le taimi e tasi.
taimi i koluma filtration, centrifuge i le 12,000 rpm (13,800 X g) mo le 30-60 sec.
4. Lafoai le filtrate ma faaopoopo 300 μL o le Buffer GDP i le koluma, incubate i le vevela o le potu mo le 1 min, centrifuge i le 12,000 rpm (13,800 X g) mo le 30-60 sec.
5. Lafoa'i le filtrate ma fa'aopopo le 700 μL o le Buffer GW (siaki pe ua fa'aopoopo muamua le ethanol atoatoa!) i le koluma, fa'amama i le 12,000 rpm (13,800 X g) mo le 30-60 sec.
Δ Fa'amolemole fa'aopoopo le Buffer GW i le puipui o le koluma adsorption, pe fa'aopopo le Buffer GW i tua o le ufiufi ma fa'afefiloi i lalo mo le 2 - 3 taimi e fesoasoani e fufulu atoa le masima o lo'o pipii i le puipui o le paipa.
6. Toe fai le Laasaga 5.
Δ Flushing with Buffer GW faalua e mafai ona faʻamautinoa ua aveese atoa le masima ma faʻaumatia le aʻafiaga i suʻega mulimuli ane.
7. Tu'u ese le fa'amama ma fa'a'ese'ese le koluma avanoa i le 12,000 rpm (13,800 X g) mo le 2 min.
8. Faʻapipiʻi le koluma i totonu o le 1.5 ml microcentrifuge tube mama, faʻaopopo le 20 - 30 μL o le Elution Buffer i le ogatotonu o le paʻu o le koluma, faʻafefe mo le 2 min, ona faʻapipiʻi lea i le 12,000 rpm (13,800 X g) mo le 1 min.Lafoai le koluma, teu le DNA maua i le -20 .
Δ Faʻaliliuina le supernatant o le Laasaga 8 i le koluma e toe faʻafefe ma muaʻi faʻamafanafanaina le Elution Buffer i le 55 (pe a DNA fragment> 3 kb) atonu e fesoasoani e faʻateleina le toe faʻaleleia.
Polokalame toe faʻaleleia o oloa PCR
E fa'atatau lenei fa'atonuga e fa'amama ai vaega o DNA mai oloa PCR, faiga fa'afoliga enzymatic ma isi oloa fa'atauva'a DNA (e aofia ai le DNA gene).E mafai e lenei vaifofo ona aveese lelei nucleotides eseese, primers, primer dimers, molelaula masima, enzymes ma isi mea leaga.
1. Fa'asa'o fa'apuupuu oloa PCR, vaifofo fa'afofoga enzymatic, ma isi mea fa'atau DNA.Fa'atatau lo latou voluma i le paipa ma fa'afeiloa'i i se fa'ama'i 1.5 ml po'o le 2 ml paipa.Faaopopo le ddH2O seia oʻo i le voluma e oʻo i le 100 μL;ae mo DNA genomic e maualuga le fa'aoga, fa'afefe i le 300 μL ma le ddH2O o le a fesoasoani i le fa'aleleia atili o le toe fa'aleleia.
2. Fa'aopoopo le 5 voluma o le Buffer GDP, fa'afefiloi mae'ae'a e ala ile feliuliua'i po'o le vortex.Afai ole vaega ole DNA o tului >100 bp, e mana'omia ona fa'aopoopo le 1.5 volumes (samples + Buffer GDP) ole ethanol.
3. Faʻaofi le koluma i tua i totonu o le faʻapipiʻi faʻapipiʻi, faʻafeiloaʻi le mixtrue i le koluma, centrifuge i le 12,000 rpm (13,800 ×g) mo le 30 - 60 sec.Afai o le voluma o le vaifofo fefiloi e> 700 μL, toe tuʻu le koluma adsorption i totonu o le faʻaputu o le aoina, faʻafeiloaʻi le vaifofo totoe i le koluma adsorption, ma centrifuge i le 12,000 rpm (13,800 × g) mo le 30 - 60 sec.
4. O le isi fa'atinoga e fa'atatau i le Laasaga 5 - 8 o le 08- 1/Gel extraction program.
Talosaga
Eseese fa'atonuga o le TAE po'o le TBE agarose gel;PCR oloa, enzymatic reaction system po'o isi oloa DNA mama'i e maua i auala eseese.O vaega na toe maua mai e afua mai70 bp -20 kb.
Fa'amatalaga
Mo na'o su'esu'ega fa'aoga.E le mo le faʻaaogaina i faʻataʻitaʻiga faʻamaonia.
1. Fa'aopoopo i ai le 80 ml o le ethanol e fa'afefete ai le Buffer GW e pei ona fa'ailoa i luga o le pine a'o le'i fa'aogaina, teu i le potu vevela.
2. Afai o le Buffer GDP e faigofie ona faʻafefe i le taimi e teu ai le vevela, e mafai ona tuʻu i le vevela o le potu mo se vaitaimi aʻo leʻi faʻaaogaina.Afai e manaʻomia, e mafai ona faʻamafanafanaina i totonu o le vai taele 37 ℃ seia oʻo ina faʻamavae atoa le paʻu, ona mafai lea ona faʻaaogaina pe a uma ona faʻafefiloi.
3. Seti le vai taele vevela i le 50 ~ 55 ℃ muamua.
4. I le 08-1/Gel extraction program step 1, fa'aiti'itia le tele o le fasi gel o le a fa'aitiitia ai le taimi fa'amavae ma fa'ateleina le toe fa'aleleia lelei (Linearized DNA e faigofie ona fa'asusu pe a fa'aauau pea ona fa'aalia ile vevela maualuga).Aua le fa'aalia le gel DNA i le UV mo se taimi umi, aua o le malamalama o le ultraviolet e mafai ona afaina ai DNA.
5. Fa'amuta le gel i le 08- 1/Gel extraction program step 2 atoa, a leai o le DNA toe fa'aleleia lelei o le a matua a'afia.
6. Preheat Elution Buffer poʻo le ddH2O i le 55 ℃, lea e fesoasoani e faʻaleleia atili ai le faʻaogaina o le DNA.E fautuaina e teu le DNA i le eluent o le 2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0 - 8.5.
