Ma'ale'ale UNG
Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) ose maua e ala i fa'amatalaga toe tu'ufa'atasi ile E. coli.O le enzyme e faʻamalosia le tuʻuina atu o le uracil e leai se totogi mai le uracil-o loʻo i ai le DNA tasi ma le faʻalua faʻatasi ma e le o toaga i le RNA.Pe a faatusatusa i le enzyme masani o le UNG o le E. coli gene origin, o le TS-UNG enzyme e maualuga lona gaioiga i le maualalo o le vevela (20 ℃ ~ 37 ℃) ma e maʻaleʻale le vevela ma faigofie ona le faʻaaogaina (50 ℃), aloese mai le faʻaleagaina o le faʻalauteleina o le dUTP. oloa i le vevela o le potu e ala i le gaioiga o totoe e mafai ona tumau pe a uma le faʻaaogaina o le enzyme UNG masani.O le mea lea, o le TS-UNG enzyme e le gata e talafeagai mo le PCR contamination prevention reactions, ae e fetaui lelei ma le RT-PCR amplification program ma e mafai ona faʻaaogaina i le RT-PCR contamination response prevention.
Talosaga Fautuaina
Fa'ateleina le Puipuia o le Fa'aleagaina
Tulaga Teuteu
-20°C mo le teuina umi, e tatau ona fa'afefiloi lelei a'o le'i fa'aogaina, aloese mai le fa'a'aisa fa'asao.
Taofi puipui
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Fa'amatalaga Vaega
Ole aofa'i ole enzyme e mana'omia e fa'aleagaina ai le 1µg ole DNA pipii tasi o lo'o iai fa'avae dU ile 1 itula ile 37°C e 1 le iunite o gaioiga (U).
Puleaina lelei
1.SDS-PAGE electrophoretic mama sili atu nai lo le 98%
2.Gaoioiga faʻaleagaina, faʻatonuga faʻapolopolo, mautu
3.Leai se gaioiga fa'atosina, leai se endonuclease po'o le fa'aleagaina.
Faatonuga
| Vaega | Volume (μL) | Fa'atonuga mulimuli |
| 10 × PCR Buffer (dNTP free, Mg²+fua) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (sui le dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Fa'afefiloi Muamuaa | 2 | 1× |
| Fa'ata'ita'iga | - | <1μg/gai |
| ddH₂O | I le 50 | - |
Fa'aaliga: a: Afai e fa'aoga mo le qPCR/qRT-PCR, e tatau ona fa'aopoopo le su'esu'ega fa'amalama i totonu ole faiga fa'afoliga.E masani lava, o se fa'auluuluga fa'ai'uga mulimuli o le 0.2 μM e mafai ona maua ai fa'ai'uga lelei;pe a le lelei le faʻatinoga o tali, e mafai ona fetuunai le faʻatonuga muamua i le va o le 0.2-1 μM.E masani lava, o le suʻega suʻesuʻe e sili ona lelei i le va o le 0.1-0.3 μM.E mafai ona faia fa'ata'ita'iga fa'agasologa fa'atotonu e su'e ai le tu'ufa'atasiga sili o le fa'avae ma le su'ega.
Fa'amatalaga
1.O le vevela tali sili ona lelei o le TS-UNG enzyme e maualalo, ma e mafai ona faʻamalieina i le va o le 20 ℃ ~ 37 ℃, o le vailaʻau o le enzyme ma le taimi tali e mafai ona faʻamalieina i le va o le 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 minu;ma o le enzyme e mafai ona le faʻaaogaina i le faʻagasologa o le faʻaliliuga faʻaliliu.
2.E talafeagai mo PCR ma RT-PCR e puipuia ai le faaleagaina.
3.Aloese mai le fa'a'aisa soo, ma 'aua ne'i fa'aalia i suiga tetele o le vevela.
4.O kenera eseese e faʻalauteleina e eseese le faʻaogaina o le dUTP ma le faʻaogaina o le UNG enzyme, o le mea lea, afai o le faʻaogaina o le UNG system e oʻo atu ai i le faʻaitiitia o le faʻaogaina o le faʻaogaina, e tatau ona fetuunaʻi ma faʻaleleia le faiga tali, pe a manaʻomia le lagolago faʻapitoa, faʻamolemole faʻafesoʻotaʻi. la matou kamupani.
