Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) o se polypeptide tasi-stranded o loʻo i ai faʻamauga 4 disulfide ma se mamafa mole e tusa ma le 13.7 kDa.RNase A o se endoribonuclease e faʻaleagaina faʻapitoa le RNA e tasi i le C ma le U toega.Aemaise lava, o le cleavage e iloa ai le fusi o le phosphodiester na faia e le 5'-ribose o se nucleotide ma le vaega phosphate i luga o le 3'-ribose o le nucleotide pyrimidine lata ane, ina ia hydrolyzed le 2,3'-Cyclic phosphates i le 3 tutusa. 'nucleoside phosphates (fa'ata'ita'iga, pG-pG-pC-pA-pG e tipi e RNase A e maua ai le pG-pG-pCp ma le A-PG).O le RNase A e sili ona malosi i le tipiina o le RNA tasi.Fautuaina galuega fa'atonuga ole 1- 100 μG/mL, fetaui ma faiga tali eseese.E mafai ona fa'aogaina le fa'amama maualalo o le masima (0-100 mM NaCl) e tipiina ai le RNA e tasi, RNA fa'alua, ma filifili RNA na fausia e le RNA-DNA hybridization.
Ae ui i lea, i le maualuga o le masima (≥0.3 M), RNase A naʻo le faʻapipiʻiina o le RNA tasi.
RNase A e masani ona faʻaaogaina e aveese ai le RNA i le taimi o le sauniuniga o le plasmid DNA poʻo le genomic DNA.Pe o loʻo galue le DNase pe leai i le taimi o le sauniuniga e mafai ona faigofie ona aʻafia ai le tali.Ole auala masani ole fa'apuna ile vai taele e mafai ona fa'aoga e fa'agata ai le gaioiga ole DNase.O lenei oloa e le o iai le DNase ma le protease, ma e le manaʻomia togafitiga vevela aʻo leʻi faʻaaogaina.E le gata i lea, e mafai foi ona faʻaaogaina lenei oloa i suʻesuʻega o meaola mole mole e pei ole suʻesuʻega o le puipuiga a le RNase ma le suʻesuʻeina o le RNA.
Tulaga teuina
Ole oloa e tatau ona teuina ile -25℃~-15℃ mo le 2 tausaga.
Fa'amatalaga
| Fa'aaliga | Pauta |
| Tele | 100mg / 1g |
| Ituaiga oloa | RNase A |
Faatonuga
Ole tasi lea o auala masani mo le saunia ole RNase A fofo teuina.E mafai foi ona sauniai isi metotia e tusa ai ma metotia masani i totonu o falesuesue poʻo tusi faʻasino (e pei osolo sa'o ile 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 po'o le Tris-NaCl solution)
1. Fa'aaoga le 10 mM sodium acetate (pH 5.2) e saunia ai le 10 mg/mL o le RNase A fofo teuina.
2. Fa'avevela ile 100 ℃ mo le 15 min.
3. Fa'alili i le vevela o le potu, fa'aopoopo le 1/10 voluma o le 1 M Tris-HCl (pH 7.4), fa'afetaui lona pH i le 7.4 (mofaʻataʻitaʻiga, faʻaopoopo le 500 mL o le 10 mg / mL RNase fofo teuina 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. Faʻapipiʻiina i lalo i le -20 ℃ mo le teuina o le aisa, lea e mafai ona mautu mo le 2 tausaga.
[Faamatalaga]:
Pe a fa'apunaina le vaifofo RNaseA i lalo o tulaga le mautonu, o le a fa'atupu le timu RNase;Faʻapala i se pH maualalo, ma afai o loʻo i ai le timuga, e mafai ona matauina, atonu e mafua mai i le i ai o le palatini le mama.Afai e maua le palapala pe a uma ona faʻapuna, e mafai ona aveese mea leaga e ala i le saosaoa o le centrifugation (13000rpm), ona teu ai lea mo le teuina o le aisa.
Fa'amatalaga
Fa'amolemole fai le PPE e mana'omia, o se ofu su'esu'e ma totigilima, ina ia mautinoa lou soifua maloloina ma lou saogalemu.
