5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix faaopoopo-UNG
Numera pusi: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Su'esu'e qRT-PCR) o se fa'afefiloi fa'avae su'esu'e tasi-tube e sili ona mautu e fetaui mo le fa'aliliuga fa'aliliu e tasi le la'asaga ma le PCR (qRT-PCR).E lagolagoina le fa'afefiloi muamua o mea muamua ma su'esu'ega ma tumau mautu pe a umi se taimi e teu ai ile vevela maualalo.O le faʻataʻitaʻiga e faʻataʻitaʻiina e mafai ona faʻaopoopo saʻo pe a faʻaaogaina, e aunoa ma se faʻaopoopoga o le faʻaogaina o le paipa / paipa.O lenei oloa e maua ai vaega, fa'ata'ita'iga DNA polymerase vevela, M-MLV, uracil DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl.2, dNTPs (fa'atasi ai ma le dUTP nai lo le dTTP), ma fa'amautu.Faatasi ai ma le genetically modified amplification reverse transcriptase ma DNA polymerase, e mafai ona faʻamaeʻaina le PCR amplification i totonu ole 20-40 minute.O lenei reagent e faʻaaogaina le paʻu faʻapitoa mo le qPCR faʻatasi ai ma enzymes fefiloi o le enzyme anti-inhibitory amplification enzyme ma le enzyme UNG.O le mea lea, e mafai ona maua ai le faʻalauteleina lelei o kenera taulaʻi ma puipuia le faʻaogaina sese e mafua mai i le PCR toega ma le aerosol pollution.O lenei reagent e fetaui lelei ma le tele o meafaifa'aili PCR fa'atupu fela'ua'i mai tagata gaosi oloa e pei ole Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ma Roche.
Vaega
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Tulaga Teuteu
O vaega uma e tatau ona teuina i le -20 ℃ mo le teuina umi ma le 4 ℃ mo le 3 masina.Fa'amolemole fa'afefiloi mae'ae'a pe a uma ona liusua ma centrifuge a'o le'i fa'aogaina.Aloese mai le fa'a'aisa soo.
qRT-PCR Reaction System Sauniuniga
| Vaega | 25μLFaiga | 50μLFaiga | Fa'ai'uga Fa'amau |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Su'esu'e Fa'afefiloia | 1μL | 2μL | 1× |
| Fa'ata'ita'iga RNAb | – | – | – |
| ddH2O | E oʻo atu i le 25μL | E oʻo atu i le 50μL | – |
1) a.O le faʻatonuga mulimuli o le primer e masani lava 0.2μM.Mo fa'ai'uga sili atu, e mafai ona fa'atumauina le fa'atonuga muamua ile va ole 0.2-1μM.E masani lava, o le su'esu'ega su'esu'e e mafai ona fa'atumauina i totonu ole va ole 0.1-0.3μM.
2) b. Pe a faʻaaogaina se Faʻatonuga PCR vave, faʻateleina le faʻaogaina o primers ma suʻesuʻega e ono maua ai iʻuga sili atu le faʻalauteleina, ma o latou fua faatatau e tatau ona faʻaleleia e tusa ai.
3) O ituaiga eseese o faʻataʻitaʻiga o loʻo i ai ituaiga eseese ma mea o loʻo i totonu o le inhibitor ma kopi numera o le kenera taulaʻi.Ole fa'ata'ita'iga voluma e tatau ona fa'atatau ile tulaga moni.Fai se vai fa'afefiloi ole fa'ata'ita'iga ile vai e leai ni nuclease po'o le TE Buffer, pe a mana'omia.
Tali Ctu'uaiga
| Fa'asologa masani PCR | Fa'atonuga PCR vave | ||||||
| Taualumaga | Temp. | Taimi | Ta'amilosaga | Taualumaga | Temp. | Taimi | Ta'amilosaga |
| Fa'aliliuga Fa'aliliu | 50℃ | 10-20min | 1 | Fa'aliliuga Fa'aliliu | 50℃ | 5min | 1 |
| Polymerase Fa'ato'aga | 95℃ | 1-5min | 1 | Polymerase Fa'ato'aga | 95℃ | 30s | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10-20s | 40-50 | Denaturation | 95℃ | 1-3s | 40-50 |
| Fa'asusu ma Fa'aopoopoga | 56-64 ℃ | 20-60s | Fa'asusu ma Fa'aopoopoga | 56-64 ℃ | 3-20s | ||
Puleaina lelei
1.Su'esu'ega o galuega: ma'ale'ale, fa'apitoa ma le toe fa'afouina o le qPCR.
2.Leai se gaioiga fa'atosina mai fafo: leai se endonuclease fa'alenu'u ma fa'aleaga mea fa'aleagaina.
Fa'amatalaga
1.Ole fua ole fa'ateleina ole DNA polymerase e le itiiti ifo ile 1kb/10s.O meafaifa'aili PCR 'ese'ese e 'ese'ese le fa'avevela ma le saosaoa o le mālūlū, faiga e pulea ai le vevela ma le fa'avevelaina o le vevela, ma fa'apea e mana'omia le fa'asilisiliina o lau fa'atonuga muamua/su'esu'e ma le auala fa'agaoioiga fa'atasi ma lau mea faigaluega PCR vave.
2.O lenei oloa e fa'atino lautele fa'aoga, ma e talafeagai mo su'esu'ega mole mole maualuga.E tolu-laasaga PCR metotia e fautuaina mo primers e maualalo le vevela vevela poʻo mo le faʻalauteleina o vaega uumi i luga ole 200 bp.
3.Talu ai ona o amplicons eseese e eseese le faʻaogaina lelei o le dUTP ma eseʻese lagona i le UNG, e tatau ona faʻamalieina le reagents pe a faʻaitiitia le faʻaogaina o le faʻaogaina o le UNG system.Fa'amolemole fa'afeso'ota'i mai matou mo fesoasoani fa'apitoa pe a mana'omia.
4.Ina ia aloese mai le faʻateleina o oloa feaveaʻi PCR, e manaʻomia le nofoaga faʻataʻitaʻi faʻapitoa ma le paipa mo le faʻalauteleina.Fa'atino i totigilima ma sui soo ma aua le tatalaina le paipa PCR pe a uma ona fa'atele.
