2×Rapid Taq Super Mix
Numera pusi: HCR2016A
2 × Rapid Taq Super Mix e faʻavae i luga o le Taq DNA Polymerase ua suia, faʻaopoopoina le faʻaopoopoga malosi, faʻaopoopoga faʻaleleia mea ma faʻaleleia le faʻaogaina o le faʻaogaina, faʻatasi ai ma le maualuga maualuga o le faʻaleleia lelei.O le saoasaoa faʻateleina o faʻataʻitaʻiga lavelave e pei o le genome i totonu o le 3 kb e oʻo atu i le 1-3 sec/kb, ma o faʻataʻitaʻiga faigofie e pei o plasmids i totonu o le 5 kb e oʻo atu i le 1 sec/kb.O lenei oloa e mafai ona fa'asaoina tele le PCR taimi tali.I le taimi lava e tasi, faʻafefiloi o loʻo i ai le dNTP ma le Mg2 +, lea e mafai ona faʻateleina e ala i le faʻaopoopoina o faʻataʻitaʻiga ma faʻataʻitaʻiga, lea e faʻafaigofie tele ai laasaga o le faʻatinoga o le suʻega.E le gata i lea, o le faʻafefiloi o loʻo i ai le vali faʻailoga electrophoretic, lea e mafai ona faʻaogaina saʻo electrophoresis pe a uma le tali.O le mea e puipuia ai i totonu o lenei oloa e fa'atumauina ai le fa'afefiloiga fa'amautu le gaioiga pe a uma ona fa'aisa ma fa'afefeteina.O le 3'-end band A o le PCR oloa e mafai ona faigofie ona faʻapipiʻi i le T vector.
Vaega
2×Rapid Taq Super Mix
Tulaga Teuteu
PCR Master Mix oloa e tatau ona teuina ile -25~-15℃ mo le 2 tausaga.
Fa'amatalaga
| Fa'amatalaga o oloa | Rapid Taq Super Mix |
| Fa'atotonuga | 2× |
| Amata vevela | Amata vevela ua fausia |
| Fa'atautau | 3′-A |
| Saosaoa tali | Vave |
| Tele (Oloa Mulimuli) | E oo atu i le 15 kb |
| Tulaga mo felauaiga | Aisa mago |
Faatonuga
1. Reaction System (50 μL)
| Vaega | Tele (μL) |
| Fa'ata'ita'iga DNA* | talafeagai |
| Fa'ailoga muamua (10 μmol/L) | 2.5 |
| Fa'asaga i tua (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×Rapid Taq Super Mix | 25 |
| ddH2O | i le 50 |
2.Polokalama Fa'aliga
| Laasaga taamilo | Vevela (°C) | Taimi | Ta'amilosaga |
| Predenaturation | 94 | 3 minu | 1 |
| Denaturation | 94 | 10 sec |
28-35 |
| Fa'asusu | 60 | 20 sec | |
| Fa'aopoopoga | 72 | 1-10 sec/kb |
Fautuaina le fa'aogaina o mamanu eseese:
| Ituaiga mamanu | Vaega ole fa'aogaina ole vaega (50 μL fa'agaioiga faiga) |
| Genomic DNA po'o le E. coli vai | 10–1,000 ng |
| Plasmid poʻo viral DNA | 0.5-50 ng |
| cDNA | 1-5 µL (e le sili atu i le 1/10 o le aofaʻi atoa o le tali PCR) |
| Fautuaina le fa'aogaina o mamanu eseese | |
Fa'amatalaga:
1.Fa'aaogāga fa'aaogā: fa'asusu atoa ma fa'afefiloi a'o le'i fa'aoga.
2. vevela vevela: O le vevela vevela o le tau Tm lautele, ma e mafai foi ona seti 1-2 ℃ maualalo ifo nai lo le tau Tm muamua.
3. Saosaoa fa'aopoopo: Seti le 1 sec/kb mo fa'ata'ita'iga lavelave e pei o genome ma E. coli i totonu ole 1 kb;seti 3 sec/kb mo faʻataʻitaʻiga lavelave pei ole 1-3 kb genome ma E. coli;seti 10 sec/kb mo faʻataʻitaʻiga lavelave i luga ole 3 kb genome ma E. coli.E mafai ona e setiina le tau i le 1 sec/kb mo se faʻataʻitaʻiga faigofie e pei ole plasmid itiiti ifo i le 5 kb, 5 sec/kb mo se faʻataʻitaʻiga faigofie e pei ole plasmid i le va o le 5 ma le 10 kb, ma le 10 sec/kb mo se faʻataʻitaʻiga faigofie pei ole plasmid e sili atu i le 10 kb.
Fa'amatalaga
1. Mo lou saogalemu ma lou soifua maloloina, fa'amolemole fai ofutino falesuesue ma totigilima lafoa'i mo le taotoga.
2. O lenei oloa e mo su'esu'ega fa'aoga NA'O!
