2×Sensi Direct Premix-UNG (Su'esu'e qPCR)
Pusi Numera: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Su'esu'e qPCR) ua mamanuina e fa'atino sa'o le PCR mai fa'ata'ita'iga e aunoa ma le su'eina o DNA po'o le tapenaga o fa'ata'ita'iga.O lenei mea fa'afefe e aofia ai le vevela-amata DNA polymerase, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (fa'atasi ma le dUTP nai lo le dTTP), ma fa'amautu, mo PCR quantitative (qPCR).O lenei reagent preforms maualuga inhibitor-faapalepale, ma o lea e mafai ona faʻaoga saʻo i le suʻesuʻeina o faʻataʻitaʻiga e pei o le faʻaʻaʻai swab, faua, anti-coagulated toto atoa, plasma, ma serum e aunoa ma le aveesea DNA.O lo'o fa'aogaina e le reagent le puipuiga fa'apitoa mo le qPCR fa'atasi ai ma enzymes fefiloi o DNA polymerase fa'ato'a fa'asaina ma le enzyme UNG.O le mea lea, e mafai ona maua ai se faʻalauteleina lelei o kenera taulaʻi i faʻataʻitaʻiga o loʻo i ai inhibitors ma faʻalavelaveina le faʻateleina o le lelei e mafua mai i le PCR toega ma le aerosol pollution.O lenei reagent e fetaui lelei ma le tele o meafaifaʻaili PCR faʻataʻitaʻi, e pei ole Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ma isi.
Vaega
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Tulaga teuina
O vaega uma e tatau ona teuina i le -20 ℃ mo le teuina umi ma le 4 ℃ mo le 3 masina.Fa'amolemole fa'afefiloi mae'ae'a pe a uma ona liusua ma centrifuge a'o le'i fa'aogaina.Aloese mai le fa'a'aisa soo.
Polokalama uila uila
| Laa | vevela | Taimi | Ta'amilosaga |
| ga'o | 50℃ | 2min | 1 |
| Fa'atosinaina o le Polymerase | 95℃ | 1-5min | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| Fa'amauina/Fa'aopoopo | 56-64 ℃ | 20-60s |
Faatonuga paipa
| Reagent | Volume per tali | Volume i le tali | Fa'ai'uga Fa'amau |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Su'esu'e Fa'afefiloi1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Fa'ata'ita'iga3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Volume atoa | 25 μL | 50 μL | - |
1. O le fa'ai'uga mulimuli o le primer e masani lava 0.2μM.Mo fa'ai'uga sili atu, e mafai ona fa'atumauina le fa'atonuga muamua ile va ole 0.2-1μM.
2. E masani lava, e mafai ona optimized le su'esu'ega fa'atonu i totonu ole va ole 0.1-0.3μM.O le fa'atonuga sili ona lelei o le su'esu'ega e feso'ota'i ma le taimi moni o le PCR amplification instrument, le ituaiga o su'esu'ega, ma le ituaiga o mea e fa'aigoaina ai le fluorescent.Fa'amolemole va'ai i le tusi lesona meafaigāluega po'o mana'oga fa'apitoa o su'esu'ega felanulanua'i ta'itasi.
3. O ituaiga fa'ata'ita'iga 'ese'ese o lo'o iai 'ese'ese ituaiga ma mea o lo'o i totonu ole inhibitor ma le numera kopi ole kenera fa'atatau.Ole fa'ata'ita'iga voluma e tatau ona fa'atatau ile tulaga moni.Fai se fa'avaivai ole fa'ata'ita'iga ile fa'aopoopoina ole vai e leai ni nuclease po'o le TE Buffer, pe a mana'omia.
4. Fautuaina le tele o fa'ata'ita'iga eseese:
| Fa'ata'ita'iga | Volume mo le tasi 50 μL tali | maualuga fua faatatau |
| Anticoagulated toto atoa | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Usu fa'a'i | 10 μL | 20% |
| Faua | 10 μL | 20% |
Puleaina lelei
1. Su'esu'ega o galuega: fa'alogona, fa'apitoa ma le toe fa'afouina o le qPCR.
2. Leai se gaioiga fa'ama'i fa'atosina: leai ni fa'alenu'u fa'atasi ma le fa'aleagaina.
Fa'amatalaga o Oloa
1. O lenei oloa e faʻaaogaina se ituaiga fou o le vevela-start DNA polymerase, lea e mafai ona faʻagaoioia ile 1-5 minute. Talu ai ona o lona faʻamalosaga tali ua sili atu ona lelei, e sili atu ona talafeagai mo le faʻaluaina poʻo le tele ole fluorescence quantitative PCR e faʻaaoga ai le metotia suʻesuʻe.
2. Afai o le tau o le Rn o le PCR amplification e maualalo tele poʻo le faʻalauteleina o loʻo manino le taofia, faʻaitiitia le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga, faʻateleina le tele o tali poʻo le faʻafefe muamua o le faʻataʻitaʻiga e mafai ona faʻaleleia ai taunuuga.
3. O le aoina o le toto, faua, mimi, fa'a'i swab, ma isi e tatau ona mulimulita'i manaoga o le falema'i, ma e mafai ona fa'aoga fou fa'ata'ita'iga e puipuia ai le fa'aleagaina o le nucleic acid.
4. Talu ai ona o amplicons eseese e eseese le faʻaogaina o le faʻaogaina i le dUTP ma le faʻaogaina i le UNG, e tatau ona faʻamalosia le faʻaogaina pe a faʻaitiitia le faʻaogaina o le faʻaogaina pe a faʻaogaina le UNG system.Fa'amolemole fa'afeso'ota'i mai matou mo fesoasoani fa'apitoa pe a mana'omia.
5. Ina ia aloese mai le faʻateleina o oloa PCR feaveaʻi i le va o le tasi-laasaga faʻaalia, e manaʻomia le nofoaga faʻataʻitaʻi faʻapitoa ma le paipa mo le faʻalauteleina.Fa'atino i totigilima ma sui soo ma aua le tatalaina le fa'agaau tali pe a uma le PCR fa'ateleina.
