PNGase F
Peptide-N-Glycosidase F(PNGase F) o le auala enzymatic sili ona aoga mo le aveesea toetoe lava o oligosaccharides fesootai-N mai glycoproteins.O le PNGase F o se amidase, lea e pipii i le va o le GlcNAc ma le asparagine toega o le mannose maualuga, hybrid, ma le lavelave oligosaccharides mai le N-linked glycoproteins.
Fa'aaogāga
O lenei enzyme e aoga mo le aveesea o meaʻai gaʻo mai polotini.
Sauniuniga ma faʻamatalaga
| Fa'aaliga | Suavai le lanu |
| Polotini mama | ≥95% (mai le SDS-PAGE) |
| Gaoioiga | ≥500,000 U/mL |
| Exoglycosidase | Leai se gaioiga na mafai ona iloa (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| Endoglycosidase H | ND |
| Protease | ND |
Meatotino
| Numera EC | 3.5.1.52(Recombinant mai microorganism) |
| mamafa mole | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric point | 8. 14 |
| pH sili ona lelei | 7.0-8.0 |
| O le vevela sili ona lelei | 65 °C |
| Fa'amatalaga fa'apitoa | Fa'amavaeina noataga glycosidic i le va o le GlcNAc ma toega asparagine Ata.1 |
| Nofoaga aloaia | N-linked glycans se'i vagana ua iai le α1-3 fucose Ata 2 |
| Activators | DTT |
| Taofi | SDS |
| Teuga vevela | -25 ~-15 ℃ |
| Fa'aleaogaina o le vevela | O se paluga tali 20µL o loʻo i ai le 1µL o PNGase F ua le mafai ona faʻaaogaina e ala i le faʻamalosi i le 75 °C mo le 10 minute. |
Ata. 1 Fa'apitoa ole palapala ole PNGase F
Ata 2 Fa'ailoga a le PNGase F.
Pe a feso'ota'i toega o le GlcNAc i totonu i le α1-3 fucose, e le mafai e PNGase F ona fa'amavaeina oligosaccharides e feso'ota'i-N mai glycoproteins.O lenei suiga e taatele i laau ma nisi iniseti glycoproteins.
Ctagata tetee
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| Vaega | Fa'atotonuga |
| 1 | PNGase F | 50 µl |
| 2 | 10×Glycoprotein Denaturing Buffer | 1000 µl |
| 3 | 10×GlycoBuffer 2 | 1000 µl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 µl |
Fa'amatalaga o le iunite
O le tasi iunite (U) ua fa'amatalaina o le aofa'i o le enzyme e mana'omia e aveese ai le> 95% o le ga'o mai le 10 µg o le RNase B ua fa'amuta i le 1 itula i le 37°C i le aofa'i o le tali o le 10 μL.
Tulaga tali
1. Fa'amuta le 1-20 µg o le glycoprotein i le vai fa'afefeteina, fa'aopoopo le 1 µl 10×Glycoprotein Denaturing Buffer ma le H2O (pe a mana'omia) e fai ai le 10 µl le aofa'i o tali.
2.Tu'u ile 100°C mo le 10 min, fa'alili ile aisa.
3.Fa'aopoopo le 2 µl 10×GlycoBuffer 2, 2 µl 10% NP-40 ma fa'afefiloi.
4.Faaopopo le 1-2 µl PNGase F ma le H2O (pe a manaʻomia) ia faia se 20 µl le aofaʻi o tali ma faʻafefiloi.
5.Fa'asusu le tali ile 37°C mo le 60 min.
6.Mo su'esu'ega SDS-PAGE po'o su'esu'ega HPLC.
