DNase I
O le DNase I (Deoxyribonuclease I) o se endodeoxyribonuclease e mafai ona eliina le DNA tasi pe lua.Na te iloa ma faʻapipiʻi faʻamaufaʻailoga phosphodiester e maua ai monodeoxynucleotides poʻo oligodeoxynucleotides e tasi pe lua faʻatasi ma vaega phosphate i le 5'-terminal ma le hydroxyl i le 3'-terminal.O le gaioiga a le DNase I e faʻalagolago i le Ca2 + ma e mafai ona faʻagaoioia e ion metal divalent e pei o Mn2 + ma Zn2 +.5mM Ca2+ puipuia le enzyme mai le hydrolysis.I le i ai o le Mg2+, e mafai e le enzyme ona iloa faʻafuaseʻi ma pipii soʻo se nofoaga i luga o soʻo se manoa DNA.I le iai o le Mn2+, e mafai ona iloa fa'atasi ma va'ava'ai laina fa'alua o le DNA i le toetoe lava o le saite e tasi e fai ai ni fasi vaega DNA pito mafolafola po'o ni vaega pipi'i pito DNA ma 1-2 nucleotides o lo'o fa'aoso.
Meatotino Oloa
Bovine Pancreas DNase Na fa'aalia a'u i le faiga fa'afefete ma fa'amamāina.
Ctagata tetee
| Vaega | Volume | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-saoloto | 20μL | 200μL | 1ml | 10ml |
| 10 × DNase I Puipui | 1ml | 1ml | 5× 1mL | 5× 10mL |
Felauaiga ma Teuina
1. Puipuiga o le teuina: - 15 ℃ ~ -25 ℃ mo le teuina;
2. Felauaiga mautu: Felauaiga i lalo o pusa aisa;
3. Tuuina i totonu: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7.6 i le 25 ℃.
Fa'amatalaga Vaega
E tasi le iunite o loʻo faʻamatalaina o le aofaʻi o le enzyme e faʻaumatia atoa le 1 μg o le pBR322 DNA i le 10 minute ile 37°C.
Puleaina lelei
RNase:5U o le DNase I ma le 1.6 μg MS2 RNA mo le 4 itula i le 37 ℃ e leai se faʻaleagaina e pei ona fuafuaina e le electrophoresis gel agarose.
siama Endotoxin:LAL-suʻega, e tusa ai ma le Chinese Pharmacopoeia IV 2020 lomiga, gel limit test method, tulafono lautele (1143).E tatau ona ≤10 EU/mg mea e maua i le endotoxin siama.
Fa'atonuga mo le Fa'aaogaina
1. Saunia le tali tali i le RNase-free tube e tusa ai ma vaega o loʻo lisiina i lalo:
| Vaega | Volume |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Puipuiga | 1 μL |
| DNase I, RNase-sa'oloto(5U/μL) | 1 U ile μg RNA |
| ddH2O | E oʻo atu i le 10 μL |
2.37 ℃ mo le 15 minute;
3. Faʻaopoopo le faʻagata faʻamutaina e taofi ai le tali, ma vevela i le 65 ℃ mo 10 minute e faʻagata ai le DNase I. E mafai ona faʻaoga saʻo le faʻataʻitaʻiga mo le suʻega faʻaliliuga e sosoo ai.
Fa'amatalaga
1. Fa'aaoga le 1U DNase I i le μg o le RNA, po'o le 1U DNase I mo le itiiti ifo i le 1μg o le RNA.
2.EDTA e tatau ona faʻaopoopo i se faʻatonuga mulimuli o le 5 mM e puipuia ai le RNA mai le faʻaleagaina i le taimi o le enzyme inactivation.
